质粒载体网MOVAS-1小鼠主动脉平滑肌细胞

　　产品简称：MOVAS-1

　　中文名称：小鼠主动脉平滑肌细胞

　　细胞数量：1*10^6

　　组织来源：成年C57BL/6小鼠，心，主动脉，平滑肌

　　形态特征：纺锤形

　　生长方式：贴壁生长

　　背景描述：1999年12月用胶原酶-弹性蛋白酶消化法分离的原代血管平滑肌细胞，用SV40大T抗原和新霉素耐药基因的逆转录病毒进行了转染。在0.4mg/mlG418存在下选择克隆并通过限制稀释进行亚克隆。

　　培养条件：DMEM高糖，10%胎牛血清，丙酮酸钠；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养

　　换液频：率2-3天

　　传代比例：1:5-1:8

　　冻存液配方：95%完全培养基，5%DMSO

　　安全性：BSL-1

　　供应限制：仅供科研

　　运输方式：常温运输（T25培养瓶）

　　细胞培养方法:

　　1、小鼠主动脉平滑肌细胞规格细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

　　①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

　　②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

　　③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

　　④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

　　⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

　　⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

　　2、细胞复苏:

　　①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

　　②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

　　3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

　　①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

　　②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

　　③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

　　④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。